ANALISIS DE LA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE FRACCIONES DE HEMOLINFA DE LARVAS DE INSECTO G. mellonella CONTRA S. aureus
Palabras clave:
G. mellonella, S. aureus, fracciones, hemolinfa, RP-HPLC, SDS-PAGE.Resumen
CarloEl trabajo tiene como objetivo inducir, aislar y evaluar la actividad antibacterial en Staphylococcus aureus (S. aureus) de fracciones derivadas de la hemolinfa total de la larva Galleria mellonella (G. mellonella). Las moléculas naturales antimicrobianas en insectos son la respuesta de la inmunidad innata contra patógenos. Las fracciones de hemolinfa de G. mellonella fueron purificadas por cromatografía. S. aureus se usó como modelo para evaluar las diferentes fracciones. Una zona de inhibición de crecimiento evidenció la actividad antibacterial. Como conclusión, S. aureus fue susceptible a dos fracciones de la hemolinfa.
Métodos: El trabajo descrito fue hecho con larvas de G. mellonella del último estadio de desarrollo y el peso promedio de las larvas estuvo entre 270 ± 30 mg. Las larvas inmunizadas fueron inyectadas con una suspensión de la bacteria S. aureus. Como control, se usaron larvas inoculadas con PBS o larvas no tratadas. El extracto metanolico de la hemolinfa de G. mellonella fue fraccionado por SPE y RP-HPLC, y las fracciones resultantes fueron almacenadas a -70ºC. El ensayo de actividad antibacteriana de cada fracción fue determinado por los tamaños de las zonas de inhibición del crecimiento de S. aureus alrededor de discos de papel filtro impregnados con cada una de las fracciones de hemolinfa. El peso molecular de las fracciones de hemolinfa fue determinado por SDS-PAGE.
Resultados: Los análisis de cromatografía mostraron que en la hemolinfa inmunizada se incrementaron algunos componentes proteicos. El método en medio líquido demostró que la hemolinfa inmunizada inhibió el crecimiento visible de S. aureus. Las fracciones purificadas de hemolinfa inmunizada consistieron de diferentes bandas desde 37 hasta por debajo de la banda de 6 kDa por SDS-PAGE. Dos fracciones separadas POR RP-HPLC de la hemolinfa infectada mostraron actividad antibacterial contra la especie S. aureus.
Conclusiones: Fue posible inducir la producción de péptidos antimicrobianos en la hemolinfa de las larvas de G. mellonella. Se pudo demostrar con los resultados de inhibición en medio líquido y por el método de difusión en discos de filtro que la actividad antibacteriana observada en la hemolinfa fue debido a la inmunización de las larvas. Después del proceso de purificación se pudo detectar en la hemolinfa de larvas inmunizadas una fracción entre 1-10 kDa con péptidos antibacterianos.
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