Determinación de una mutación puntual en el gen Est9 de Rhipicephalus (Boophilus) microplus resistente a organofosforados
Palabras clave:
Carboxilesterasa, Colombia, garrapata, mutaciones, Reacción de Cadena de Polimerasa, Resistencia a acaricidas (Fuente, CAB)Resumen
Rhipicephalus microplus es la garrapata más prevalente, responsable de transmitir hemoparásitos en ganado bovino de áreas tropicales y subtropicales. Polimorfismos en su genoma confieren resistencia a los acaricidas usados para su control. Una mutación en el gen Est9 que codifica una carboxilesterasa en R. microplus, confiere resistencia a compuestos organofosforados. Este estudio identificó una mutación en garrapatas de campo, colectadas en un predio con historial de resistencia hacia acaricidas organofosforados mediante el uso de PCR – RFLP. Las garrapatas fueron sometidas a un compuesto organofosforado comercial del 83% de concentración, en una prueba de inmersión de teleoginas y el ADN de garrapatas fenotípicamente susceptibles, resistentes y medianamente resistentes fue extraído y usado en la amplificación de un fragmento de 372 pb del gen Est9, mediante el uso de cebadores específicos. Los productos de PCR fueron digeridos con la edonucleasa EcoRI, registrándose el patrón de bandas en los genotipos homocigoto natural, homocigoto mutante y heterocigoto. La prueba exacta de Fisher arrojó diferencias altamente significativas (p=0.0022) entre teleoginas susceptibles y aquellas con algún nivel de resistencia, mostrando relación directa entre fenotipo y genotipo. Así, se comprobó por primera vez en Colombia la presencia de una mutación en el gen Est9 de garrapatas R. microplus resistentes a organofosforados.
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Citas
Alonso-Díaz, M.A., Rodríguez-Vivas, R.I., Fragoso-Sánchez, H., Rosario-Cruz, R., 2006. Ixodicide resistance of the Boophilus microplus tick to ixodicides. Archivos de Medicina Veterinaria 38 (2), 105 – 113.
Baffi, M., Rocha, G., Ueira, C., Soares, C., Ceron, C., Bonetti, A., 2008. Esterase enzymes involved in pyrethroid and organophospate resistance in a Brazilian population of Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Acari: Ixodidae). Molecular and Biochemical Parasitology 160, 70 – 73.
Baffi, M.A., Rocha G., Ueira, C., Soares, C., Ricardo, L., Bonetti, A.M., 2007. Identification of point mutations in a putative carboxylesterase and their association with acaricide resistance in Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Acari: Ixodidae). Veterinary Parasitology 148, 301 – 309.
Benavides, E., Polanco, N., Vizcaíno, O., Betancur, O., 2012. Criterios y protocolos para el diagnóstico de hemoparásitos en bovinos. Revista Ciencia Animal 5, 31- 49.
Chen, A., He, H., Temeye, R. K., Jones, S., Green, P., Barke, R.S. 2009. A survey of Rhipicephalus microplus populations for mutations associated with pyrethroid resistance. Journal of Economic Entomology 102(1), 373 – 380.
Chevillon, CH., Basile, B., Barré, N., Durand, P., Aranthau, C., Meeus, T., 2007a. Direct and indirect inferences on parasite mating and gene transmission patterns Pangamy in the cattle tick Rhipicephalus microplus. Infection Genetics and Evolution 7, 298 – 304.
Chevillon, CH., Ducornez, S., Meeus, T., Koffi, B., Gaia, H., Delathiere, J., Barré, N. 2007b. Accumulation of acaricide resistance mechanisms in Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Acari: Ixodidae) populations from Nueva Caledonia Island. Veterinary Parasitology 147, 276 – 288.
Díaz, E., Vallejo, G., 2013. Identificación de un polimorfismo del gen Est9 relacionado con resistencia a piretroides en Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Revista MVZ Córdoba 18, 3708 – 3714.
Díaz, E. 2012. Estudio molecular del gen de una carboxilesterasa relacionada con quimiorresistencia en la garrapata Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Tesis, Maestría en Ciencias Biológicas, Universidad del Tolima.
Domingues, L., Alves, B., Passos, A., Pinto, A., Medeiros, A., Cerqueira, L., Silaghi, C., Pfister, K., Friche, L., 2012. Survey of pyrethroid and organophosphate resistance in Brazilian field populations of Rhipicephalus (Boophilus) microplus: Detection of C190A mutation in domain II of the para-type sodium channel gene. Veterinary Parasitology 189, 327 – 332.
Domínguez- García, D., Rosario-Cruz, R., Almazan-García, C., Saltijeral, J., de la Fuente, J., 2010. Boophilus microplus: Biological and molecular aspects of acaricide resistance and their impact on animal health. Tropical and subtropical Agroecosystems 12, 181 – 192.
FAO. (2004). Guidelines resistance management and integrated parasite control in rumiants. Consultado el 15 de junio de 2014. ftp://ftp.fao.org/docrep/fao/010/ag014e/ag014e00. pdf
Furlong, J., 2002. Teste do biocarrapaticidograma (Imersäo de teleoginas). III Curso Internacional Progresos no Diagnostico das Parasitoses dos Animais de Producto. Programa de Treinamento para tercerios países. Salvador, Brasil.
Guerrero, F., Nene, V., 2008. Gene structure and expresión of a pyrethroid-metabolizing esterase, CzEst9, from a pyrethroid resistant Mexican population of Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Journal of Medical Entomology 45(4), 677 – 685.
Guerrero, F., Pruett, J., Li, A. 2002. Molecular and biochemical diagnosis of esterase-mediated pyrethroid resistance in a Mexican strain of Boophilus microplus (Acari:Ixodidae). Experimental and Applied Acarology 28, 257 – 264.
Hernández, R., He, H., Chen, A., Waghela, S., Wayne, G., George, J., Gale, G. 2000. Identification of a point mutation in an esterase gene in different populations of the southern cattle tick, Boophilus microplus. Insect Biochemistry and Molecular Biology 30, 969 – 977.
Halos, L., Jamal, T., Vial, L., Maillars, R., Suau, A., Le Menach, A., Vayssier-Taussat, M. 2004. Determination of an efficient and reliable method for DNA extraction from ticks. Veterinary Research 35, 709 – 713.
Hunt, P. 2011. Molecular diagnosis of infections and resistance in veterinary and human parasites. Veterinary Parasitology 180, 12-46.
Jabbar, A., Iqbal, Z., Muhammad, G., Nisar, M., Zahid, R., Sandhu, Z., 2005. The interplay of molecular biology and veterinary parasitology: A need of the time. International Journal of Agriculture and Biology 7(5), 845 – 852.
Murrell, A., Barker, S., 2003. Synonymy of Boophilus Curtice, 1891 with Rhipicephalus Koch, 1844 (Acari: Ixodidae). Systematic Parasitology 56(3), 169-172.
Nari, A. 2011. Towards sustainable parasite control practices in livestock production with emphasis in Latin America. Veterinary Parasitology 180, 2 – 11.
Porto Neto, L., Jonsson, N., D’Occhio, M., Barendse, W., 2011. Molecular genetic approaches for identifying the basis of variation in resistance to tick infestation in cattle. Veterinary Parasitology 180, 165 – 172.
Rodríguez, I., Gern, L., Rais, O., Fuentes, O., González, R., Fernández, C. 2009. Detección molecular de patógenos emergentes de importancia médica y veterinaria en garrapatas capturadas sobre caballos domésticos. Revista Cubana de Medicina Tropical 61(1), 57-62.
Rodríguez, R., Trees, A., Rosado, J., Villegas, S., Hodgkinson, J., 2011. Evolution of acaricide resistance: Phenotypic and genotypic changes in field populations of Rhipicephalus (B.) microplus in response to pyrethroid selection pressure. International Journal for Parasitology 41, 895 – 903.
Rosario-Cruz, R., Almazan, C., Miller, R., Domínguez- García, D., Hernández-Ortiz, R., de la Fuente, J., 2009. Genetic basis and impact of tick acaricide resistance. Frontiers in Bioscience 14, 2657 – 2665.
Vargas, M., Moreno, C., Sánchez, D., Pérez, D., Valdés, M., Alfonso, A., Joglar, M., Machado, H., Rodríguez, E., Méndez, L., Lleonart, R., Suarez, M., Fernández, E., Estrada, M., Rodriguez- Mallon, A., Farnós, O., 2010. Two initial vaccinations with the Bm86-based Gavacplus vaccine against Rhipicephalus (Boophilus) microplus induce similar reproductive suppression to three initial vaccinations under production conditions. BioMed CentralVeterinary Research 6, 43 – 51.
